哺乳动物细胞培养过程

哺乳动物细胞经过组织提取、原代培养、继代培养等过程。传代培养按条件可分为细胞系培养和细胞系培养。各工序简述如下：

原代培养：从动物体内取出组织后，切碎，用各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）和机械方法（反复抽吸和吸管吹气）处理，然后分散成单个细胞，在适当的培养基中培养，使细胞能够生存、成长和繁殖。原代细胞培养一般是指从动物体内取出细胞后10代内的细胞培养。

经过原代细胞培养、细胞分裂和繁殖后，培养物逐渐增多，生长充满培养空间，然后相互接触，产生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶中进行传代培养。

传代（传代）：将原代细胞从培养瓶中取出，制备细胞悬液，分为两个或两个以上的培养瓶进行进一步培养，称为继代培养。

细胞系：细胞系是原代培养第一代后的细胞系。如果一个细胞系的存活时间是有限的，它被称为有限细胞系。获得无限繁殖能力并能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。

细胞系：从生物鉴定的细胞系中，经单细胞分离培养或筛选形成的细胞群称为细胞系。然后从原代细胞株中分离培养出不同形状的细胞群，形成亚克隆。

哺乳动物细胞培养条件

不同的哺乳动物细胞在每个阶段都需要基本的培养条件

1、无菌无毒环境：对培养基及所有培养设备进行无菌处理；在培养基中加入抗生素，防止培养过程中污染；定期更换培养基，去除代谢产物，防止对培养细胞的损害。

2、营养：液体合成培养基含有糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等，通常需要添加血浆、血清等天然成分

3、适宜温度和pH值：人和哺乳动物细胞最适温度为36±0.5℃。适宜的pH值为7.2-7.4。

4、气体环境：气体环境一般为“95%空气+5%二氧化碳”混合气体。氧是细胞代谢所必需的气体，二氧化碳维持培养基的pH值。